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j2

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】载体自连问题

想请教一下,如果单酶切后纯化,然后直接放-20℃冰箱,过几天再进行另一种酶的单酶切,第一种酶的酶切位点会不会出现自连?
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修炼ing,当虫仙……
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)


j2(金币+1,VIP+0):太好了~ 1-4 18:33
纯化后的单酶切产物,在没有T4连接酶的情况下-20保存,是不会发生自连的
天行健,君子以自强不息地势坤,君子以厚德载物
2楼2010-01-04 17:43:38
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


j2(金币+1,VIP+0):缓冲液~~~ 1-4 18:34
一般不会自连,但是最好不要这么做,为什么不直接双酶切呢
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-01-04 17:46:23
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有时酶的buffer在同一类型情况下,酶的活性是不一样的
例如:NEB的酶它的buffer共有四种,EcoR I 和 Mse I 在buffer2情况下均能达到较高的酶活性。如果你所选用的酶使用的buffer不一样,最好是单酶切,那样酶切反应会更加充分
天行健,君子以自强不息地势坤,君子以厚德载物
4楼2010-01-05 10:36:05
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