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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】载体自连问题
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j2

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】载体自连问题

想请教一下，如果单酶切后纯化，然后直接放-20℃冰箱，过几天再进行另一种酶的单酶切，第一种酶的酶切位点会不会出现自连？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
1楼 2010-01-04 17:33:28
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)
★
j2(金币+1,VIP+0):太好了~ 1-4 18:33
纯化后的单酶切产物，在没有T4连接酶的情况下-20保存，是不会发生自连的
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天行健，君子以自强不息地势坤，君子以厚德载物
2楼2010-01-04 17:43:38
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
j2(金币+1,VIP+0):缓冲液~~~ 1-4 18:34
一般不会自连，但是最好不要这么做，为什么不直接双酶切呢
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-01-04 17:46:23
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有时酶的buffer在同一类型情况下，酶的活性是不一样的
例如：NEB的酶它的buffer共有四种，EcoR I 和 Mse I 在buffer2情况下均能达到较高的酶活性。如果你所选用的酶使用的buffer不一样，最好是单酶切，那样酶切反应会更加充分
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天行健，君子以自强不息地势坤，君子以厚德载物
4楼2010-01-05 10:36:05
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