应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取基因组DNA问题
111/2返回列表12下一页
查看: 840  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

veronica5129

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提取基因组DNA问题

大家好 最近用酚氯仿的方法抽提了Hela cell 的gDNA ,跑样看有蛋白质和RNA污染（胶孔里有杂质），大家建议一下怎么除净里面的蛋白 啊？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
性格决定命运
1楼 2010-01-04 13:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 1-4 16:45
酚氯仿抽提时取上清液不要贪多，尽量不要吸到中间的那层。
赞一下(11人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-01-04 13:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+4,VIP+0):有的老板白菜也舍不得买啊 1-4 16:46
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足PCR,酶切等。你也可以用试剂盒提，好像现在这些东西价格跟白菜差不多了
赞一下(11人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-01-04 14:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 1-4 16:46
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-1-4 14:03:
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足 ...

建议用kit吧，方便多了，提取质量也好
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2010-01-04 14:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 1-4 16:46
如果不是很高要求，有一些RNA和蛋白质污染不会影响后续实验，如PCR、SOUTHERN BLOT等，无必要浪费时间和精力去消除这些污染。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2010-01-04 15:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)
用酚氯仿再抽一次
有蛋白不影响PCR
赞一下 回复此楼
6楼2010-01-04 17:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

veronica5129

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-1-4 14:03:
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足 ...

担心再次抽屉会损失太多，我提的基因组需要做酶切，进行splinkerette PCR(LM-PCR)，可惜每次酶切都很难完全切开，不知是不是DNA纯度问题。
赞一下 回复此楼
性格决定命运
7楼2010-01-04 22:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

veronica5129

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by won7 at 2010-1-4 15:01:
如果不是很高要求，有一些RNA和蛋白质污染不会影响后续实验，如PCR、SOUTHERN BLOT等，无必要浪费时间和精力去消除这些污染。

我提的基因组需要做酶切，进行splinkerette PCR(LM-PCR)，可惜每次酶切都很难完全切开，不知是不是DNA纯度问题。
赞一下 回复此楼
性格决定命运
8楼2010-01-04 22:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xyls6868

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切似乎可以用来检测DNA的质量了呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-05 10:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangtengxu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1.少吸中间层
2.多抽提一次
赞一下(1人) 回复此楼
想和有趣的人一起做有趣的事。
10楼2010-01-05 11:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 veronica5129 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 070300化学求调剂 +3 苑豆豆 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:48 by ColorlessPI
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 334求调剂 +3 志存高远意在机� 2026-03-16 3/150 2026-03-18 08:34 by lm4875102
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭