应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取基因组DNA问题
111/2返回列表12下一页
查看: 900  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

veronica5129

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提取基因组DNA问题

大家好 最近用酚氯仿的方法抽提了Hela cell 的gDNA ,跑样看有蛋白质和RNA污染（胶孔里有杂质），大家建议一下怎么除净里面的蛋白 啊？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
性格决定命运
1楼 2010-01-04 13:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 1-4 16:45
酚氯仿抽提时取上清液不要贪多，尽量不要吸到中间的那层。
赞一下(11人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-01-04 13:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+4,VIP+0):有的老板白菜也舍不得买啊 1-4 16:46
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足PCR,酶切等。你也可以用试剂盒提，好像现在这些东西价格跟白菜差不多了
赞一下(11人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-01-04 14:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 1-4 16:46
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-1-4 14:03:
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足 ...

建议用kit吧，方便多了，提取质量也好
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2010-01-04 14:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 1-4 16:46
如果不是很高要求，有一些RNA和蛋白质污染不会影响后续实验，如PCR、SOUTHERN BLOT等，无必要浪费时间和精力去消除这些污染。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2010-01-04 15:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)
用酚氯仿再抽一次
有蛋白不影响PCR
赞一下 回复此楼
6楼2010-01-04 17:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

veronica5129

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-1-4 14:03:
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足 ...

担心再次抽屉会损失太多，我提的基因组需要做酶切，进行splinkerette PCR(LM-PCR)，可惜每次酶切都很难完全切开，不知是不是DNA纯度问题。
赞一下 回复此楼
性格决定命运
7楼2010-01-04 22:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

veronica5129

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by won7 at 2010-1-4 15:01:
如果不是很高要求，有一些RNA和蛋白质污染不会影响后续实验，如PCR、SOUTHERN BLOT等，无必要浪费时间和精力去消除这些污染。

我提的基因组需要做酶切，进行splinkerette PCR(LM-PCR)，可惜每次酶切都很难完全切开，不知是不是DNA纯度问题。
赞一下 回复此楼
性格决定命运
8楼2010-01-04 22:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xyls6868

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切似乎可以用来检测DNA的质量了呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-05 10:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangtengxu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1.少吸中间层
2.多抽提一次
赞一下(1人) 回复此楼
想和有趣的人一起做有趣的事。
10楼2010-01-05 11:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 veronica5129 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 310求调剂 +13 666真好 2026-04-11 14/700 2026-04-12 16:48 by 1005715100
[考研] 求调剂 +16 张番茄不炒蛋 2026-04-10 17/850 2026-04-12 13:58 by 熬夜成！
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 286求调剂 +26 Faune 2026-04-06 26/1300 2026-04-12 10:24 by lhj2009
[考研] 332求调剂 +14 蕉蕉123 2026-04-10 14/700 2026-04-12 00:27 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 本人女孩 +7 吼吼， 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 求调剂288 +6 ioodiiij 2026-04-10 8/400 2026-04-10 21:07 by zhouxiaoyu
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 江苏大学 工科调剂 捡漏 +3 Evan_Liu 2026-04-09 5/250 2026-04-10 10:22 by Evan_Liu
[考研] 08工学 309分求调剂 +6 Yin DY 2026-04-08 6/300 2026-04-10 09:18 by Delta2012
[考研] 086004 求调剂 309 +7 Yin DY 2026-04-08 7/350 2026-04-09 13:59 by Delta2012
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +13 相信必会光芒万� 2026-04-06 16/800 2026-04-09 13:54 by 徐良白眉大侠
[考研] 材料科学与工程320求调剂，080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 333求调剂 +6 合乘杨习夕 2026-04-06 6/300 2026-04-07 09:44 by 猪会飞
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭