应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取基因组DNA问题
111/2返回列表12下一页
查看: 856  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

veronica5129

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提取基因组DNA问题

大家好 最近用酚氯仿的方法抽提了Hela cell 的gDNA ,跑样看有蛋白质和RNA污染（胶孔里有杂质），大家建议一下怎么除净里面的蛋白 啊？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
性格决定命运
1楼 2010-01-04 13:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 1-4 16:45
酚氯仿抽提时取上清液不要贪多，尽量不要吸到中间的那层。
赞一下(11人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-01-04 13:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+4,VIP+0):有的老板白菜也舍不得买啊 1-4 16:46
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足PCR,酶切等。你也可以用试剂盒提，好像现在这些东西价格跟白菜差不多了
赞一下(11人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-01-04 14:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 1-4 16:46
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-1-4 14:03:
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足 ...

建议用kit吧，方便多了，提取质量也好
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2010-01-04 14:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 1-4 16:46
如果不是很高要求，有一些RNA和蛋白质污染不会影响后续实验，如PCR、SOUTHERN BLOT等，无必要浪费时间和精力去消除这些污染。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2010-01-04 15:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)
用酚氯仿再抽一次
有蛋白不影响PCR
赞一下 回复此楼
6楼2010-01-04 17:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

veronica5129

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-1-4 14:03:
我们一般也是酚：氯仿：异戊醇抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提两次，就差不多了，就是注意吸取上清的时候宁缺毋滥，不要吸到中间蛋白层。如果还是蛋白很多可以再用氯仿异戊醇再抽提一次，这样提取的DNA应该能满足 ...

担心再次抽屉会损失太多，我提的基因组需要做酶切，进行splinkerette PCR(LM-PCR)，可惜每次酶切都很难完全切开，不知是不是DNA纯度问题。
赞一下 回复此楼
性格决定命运
7楼2010-01-04 22:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

veronica5129

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by won7 at 2010-1-4 15:01:
如果不是很高要求，有一些RNA和蛋白质污染不会影响后续实验，如PCR、SOUTHERN BLOT等，无必要浪费时间和精力去消除这些污染。

我提的基因组需要做酶切，进行splinkerette PCR(LM-PCR)，可惜每次酶切都很难完全切开，不知是不是DNA纯度问题。
赞一下 回复此楼
性格决定命运
8楼2010-01-04 22:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xyls6868

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切似乎可以用来检测DNA的质量了呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-05 10:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangtengxu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1.少吸中间层
2.多抽提一次
赞一下(1人) 回复此楼
想和有趣的人一起做有趣的事。
10楼2010-01-05 11:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 veronica5129 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298求调剂 +6 上岸6666@ 2026-03-20 6/300 2026-03-22 20:21 by edmund7
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭