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jackchen129至尊木虫 (职业作家)
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【求助/交流】酿酒酵母DNA提取
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酿酒酵母DNA如何提取，最好有详细步骤。 谢谢！！！ |
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yuanbo934
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| （1）挑取少量菌体（一环），置于一已灭菌的1.5 ml的离心管内； （2）加入100 μl裂解液（100 Mm Tris, 30 Mm EDTA, 0.5% SDS, pH 8.0, 15P灭菌30分钟备用）； （3）100 °C水浴15分钟； （4）加入100 μl 2.5 M的醋酸钾后，置于冰上30分钟至一个小时； （5）在4 °C下13000rpm离心5分钟，上清液移至一新1.5 ml离心管内； （6）加入等体积的氯仿-异戊醇(24: 1)，剧烈振荡后，13000 rpm，离心15分钟，移取上清液至另一灭菌的1.5 ml的离心管内； （7）重复上一步，直到两相之间没有沉淀，将上清液移至另一灭菌的0.5 ml的离心管内； （8）加入等体积的冷的异丙醇，放置在－20 °C下静置15分钟； （9）13000 rpm离心15分钟； （10）用100 μl 70%的乙醇洗涤沉淀； （11）用100 μl 100%的乙醇再次洗涤沉淀； （12）将沉淀置于真空干燥器中抽干或自然干燥； （13）加入50 μl已灭菌的Milli-Q水，在4 °C下溶解两小时； （14）放于－20 °C冰箱内冷藏备用。 2. PCR |
2楼2010-01-04 11:01:00
yanfeier
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一试剂盒 上面有具体的操作步骤。 二手动操作 （1）挑取少量菌体置于一已灭菌的1.5 ml的离心管内； （2）加入100 μl裂解液（100 Mm Tris, 30 Mm EDTA, 0.5% SDS, pH 8.0, 15P灭菌30分钟备用）； （3）100 °C水浴15分钟； （4）加入100 μl 2.5 M的醋酸钾后，置于冰上30分钟至一个小时； （5）在4 °C下13000rpm离心5分钟，上清液移至一新1.5 ml离心管内； （6）加入等体积的氯仿-异戊醇(24: 1)，剧烈振荡后，13000 rpm，离心15分钟，移取上清液至另一灭菌的1.5 ml的离心管内； （7）重复上一步，直到两相之间没有沉淀，将上清液移至另一灭菌的0.5 ml的离心管内； （8）加入等体积的冷的异丙醇，放置在－20 °C下静置15分钟； （9）13000 rpm离心15分钟； （10）用100 μl 70%的乙醇洗涤沉淀； （11）用100 μl 100%的乙醇再次洗涤沉淀； （12）将沉淀置于真空干燥器中抽干或自然干燥； （13）加入50 μl已灭菌的Milli-Q水，在4 °C下溶解两小时； （14）放于－20 °C冰箱内冷藏备用。 2. PCR |
3楼2010-01-04 12:02:55