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chinosaur木虫 (正式写手)
求购IQ卡
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[交流]
【求助/交流】高AT含量的PCR问题
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小弟最近有一个PCR始终做不出来，原因很可能就是这个片段AT含量太高。该片段常约3.15kb，AT含量高达64.2%，而且分布均匀，做了很多次没做出来，于是采取分段来做，还好把1800到3150做出来了，前面的1-1000左右也做出来了，但中间的1000到1800怎么也做不出来，我试过很多方法，比如使用长达30个碱基与模板配对的引物，然后提高退火温度，减少退火时间，减少酶的量，减少 引物的量，提高dNTP的量，等等，都试过了，始终只有一个500bp左右的非特异性条带出现，也不是很亮， 另外，序列里经常有4到5个重复的A在一起的情况，请各位大侠指点指点。 先谢过啦！ 简单总结下可能的原因： 1.AT含量太高 2.序列中有很多重复的A在一起 [ Last edited by chinosaur on 2010-1-3 at 22:56 ] |
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