24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1113  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wsshforget

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr细菌基因组基因P不出来怎么回事,条件见帖子。

我将TET基因整合到细菌的基因组上,但是一直P不出来,抗生素筛选能选出来菌种,是不是因为变性时间不够吗?
我的体系是
buffer 2.5微升 (加有mg2+)
dntp        2
PF            1
PR            1
rtag          0.25
模版     挑取单菌落
ddH2O      18.25
总体积    25微升


PCR条件
94  5min
94  40s
52   30s
72   1min30s
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

变性时间该是够了

其他的不清楚,经验也不多
3楼2009-12-31 20:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

spiderboy

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0): 12-31 21:13
是菌落PCR验证吗?
建议可以用菌液PCR。就是把你挑的单菌落培养几个小时,然后取3至5微升煮沸变性后,做模板,按正常的条件PCR即可。
估计是基因没有被整合进去的可能性比较大。
还有,楼主,你的dNTP用量有点多了,也可能会抑制酶活,取1微升就很足够了。
2楼2009-12-31 20:57:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的目的是什么啊?
鉴定吗?
如果是,可以交给测序公司做吧,测个序就知道对不对啦。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
4楼2009-12-31 21:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsshforget

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by spiderboy at 2009-12-31 20:57:
是菌落PCR验证吗?
建议可以用菌液PCR。就是把你挑的单菌落培养几个小时,然后取3至5微升煮沸变性后,做模板,按正常的条件PCR即可。
估计是基因没有被整合进去的可能性比较大。
还有,楼主,你的dNTP用量有点 ...

偶尔能P出来,就算P出来的时候也有杂带,大部分情况下P不出来,换了引物后还是P不出来,很是怪异。
5楼2010-01-01 21:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 +4 小聂爱学习 2026-04-14 4/200 2026-04-14 20:54 by fqwang
[考研] 302分求调剂 +10 凡语祈愿 2026-04-08 11/550 2026-04-14 16:50 by jiangguiquan11
[考研] 恳请有学校收留 +3 柯淮然 2026-04-12 3/150 2026-04-14 16:25 by 逆水乘风
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 本科211,报考085601-310分 +16 ararak 2026-04-13 16/800 2026-04-14 14:55 by Delta2012
[考研] 284求调剂 +17 让我上岸吧阿西 2026-04-09 17/850 2026-04-14 14:44 by 不我拉绿卡
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 0854调剂 +10 长弓傲 2026-04-11 11/550 2026-04-13 10:38 by wp06
[考研] 求调剂 +16 张番茄不炒蛋 2026-04-10 17/850 2026-04-12 13:58 by 熬夜成!
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH(等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 一志愿沪9,326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
信息提示
请填处理意见