24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 381  |  回复: 3
当前主题已经存档。

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】阳性克隆的挑选

把一个片段连接到一个载体中(含有M13位点),用自己设计的引物做菌落PCR,检测的菌落都是阳性的,但是用M13 正向引物和自己设计的反向引物检测,根本就没有条带,不明白这是为什么,不知各位虫友是否碰到类似问题?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

★ ★ ★
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-29 21:36
amisking(金币+2,VIP+0): 12-29 21:37
那可能是你的PCR没有反应好吧,你自己的引物p出来的条带大小对么,如果你用M13的引物p的话,菌不要放太多,然后预变性5min,然后退火温度用55度,再试试看,祝你成功
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-12-29 21:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

自己的引物P出来的片段大小是对的。我P M13和自己的反向引物是用的是特异引物的退火温度(59),变性10分钟。
3楼2009-12-29 21:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
Originally posted by gdongli8325 at 2009-12-29 21:36:
自己的引物P出来的片段大小是对的。我P M13和自己的反向引物是用的是特异引物的退火温度(59),变性10分钟。

不用变性那么长时间,变性那么长时间酶会吃不消,或者你先煮菌然后再配PCR体系然后反应
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-12-29 21:53:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gdongli8325 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +19 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 20/1000 2026-04-14 16:03 by zs92450
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 生物学调剂,一志愿西南大学348,Top期刊一区二作、二区三作,三等奖学金三次 +5 candyyyi 2026-04-09 5/250 2026-04-13 09:02 by 可淡不可忘
[考研] 求调剂 +16 张番茄不炒蛋 2026-04-10 17/850 2026-04-12 13:58 by 熬夜成!
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +5 弱水听文 2026-04-09 5/250 2026-04-12 13:16 by shengxi123
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 求调剂 +6 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-11 20:14 by 逆水乘风
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
信息提示
请填处理意见