应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】阳性克隆的挑选
41/1返回列表
查看: 416  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】阳性克隆的挑选

把一个片段连接到一个载体中(含有M13位点），用自己设计的引物做菌落PCR，检测的菌落都是阳性的，但是用M13 正向引物和自己设计的反向引物检测，根本就没有条带，不明白这是为什么，不知各位虫友是否碰到类似问题?
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-29 20:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★ ★
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-29 21:36
amisking(金币+2,VIP+0): 12-29 21:37
那可能是你的PCR没有反应好吧，你自己的引物p出来的条带大小对么，如果你用M13的引物p的话，菌不要放太多，然后预变性5min，然后退火温度用55度，再试试看，祝你成功
赞一下(21人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-12-29 21:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)
自己的引物P出来的片段大小是对的。我P M13和自己的反向引物是用的是特异引物的退火温度（59），变性10分钟。
赞一下 回复此楼
3楼2009-12-29 21:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by gdongli8325 at 2009-12-29 21:36:
自己的引物P出来的片段大小是对的。我P M13和自己的反向引物是用的是特异引物的退火温度（59），变性10分钟。

不用变性那么长时间，变性那么长时间酶会吃不消，或者你先煮菌然后再配PCR体系然后反应
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-12-29 21:53:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gdongli8325 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭