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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】感受态细胞制备出了点问题
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hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】感受态细胞制备出了点问题

我做的是制备感受态细胞，DH5α，用的培养基是LB ，在摇床上37°C培养了8个小时，还是没有长出菌来,怎么回事啊
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1楼 2009-12-29 18:38:42
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0):maybe 12-29 20:04
hutingting(金币+2,VIP+0): 12-30 21:13
那是菌种的问题，考虑重新选种吧
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2楼2009-12-29 18:43:51
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dy_414

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
hutingting(金币+2,VIP+0): 12-30 21:14
可能培养基里有抗生素？
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我坚信，rp是攒出来的
3楼2009-12-29 19:24:45
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0):有道理 12-29 20:05
hutingting(金币+2,VIP+0): 12-30 21:14
重新接种一次试试，不行的话可能菌种问题，或者如楼上所言有抑菌物质存在
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2009-12-29 19:56:50
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0):细致 12-29 20:05
hutingting(金币+2,VIP+0):谢谢，我等了7个小时，长出来了，只是后面的转化还没做，还不知道结果咋样 12-30 21:15
1、LB培养基配置的没有问题吧？
2、是从平板上挑的单菌落吗？
3、菌种有没有问题？
4、接种量有多少？
正常情况下3-4小时就可以到0.4-0.5了。
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5楼2009-12-29 20:02:38
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
应该是菌种有问题了。建议重新接种，或者先拿别人的菌种试一下了。
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6楼2009-12-29 20:04:57
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
你是里面转有质粒的还是就是空菌摇的，你是不是加错抗生素了啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2009-12-29 21:26:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
amisking(金币+3,VIP+0): 1-16 22:29
我用DH5α做感受态细胞的时候是从平板上接种到指形瓶里，摇到大概1.0，此时正处在对数期，再接种到三角瓶里扩大培养的。5楼的朋友说的3-4小时就可以到0.4-0.5，这和我的扩大培养步骤里的情况相似，虽然我需要的时间还是久了些，但是差异应该不显著。直接用牙签挑保存在冰箱里的平板上的菌接种到3角瓶里的话，8小时还没有看得出明显生长是很正常的，因为接种量不够大，而且细胞本来在休眠，迟缓期比较长。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2009-12-30 00:10:04
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
起始接种量是多少？
牙签挑的话，至少12小时肉眼观察才比较明显
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9楼2009-12-30 08:49:47
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1.菌种问题
2.有病毒污染
3.培养基的问题
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10楼2009-12-30 14:00:58
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