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yzy_0106

金虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】色谱柱的冲洗

流动相是缓冲盐,每次使用后用10%甲醇冲洗的,当时就听人说洗20min就可以,现在觉得时间不够,因为柱子比较长,30cm。有点担心啊,请问有什么可以解决的办法啊?柱子已经用了一段时间了,会不会坏了啊?

[ Last edited by yzy_0106 on 2009-12-29 at 10:59 ]
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hyggelig

银虫 (小有名气)

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opq691(金币+2,VIP+0):谢谢回帖交流 12-29 19:26
如果担心坏的话,可以低流速0.5或者0.3ml/min
用90%水:10%甲醇冲洗150min或者更长
然后梯度走到100%甲醇,再冲洗久一点,应该还好吧
如果你的buffer是磷酸盐类的东东,以后在冲洗色谱柱的时候建议还是冲洗久一点吧
2楼2009-12-29 11:05:18
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yzy_0106

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hyggelig at 2009-12-29 11:05:
如果担心坏的话,可以低流速0.5或者0.3ml/min
用90%水:10%甲醇冲洗150min或者更长
然后梯度走到100%甲醇,再冲洗久一点,应该还好吧
如果你的buffer是磷酸盐类的东东,以后在冲洗色谱柱的时候建议还是冲洗久一 ...

谢谢啊!不明白的是为什么要走一个梯度呢?
3楼2009-12-29 11:10:49
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)

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我们用的柱子是25cm的,一般如果流动相里含缓冲盐,都是用10%甲醇冲半小时,再换纯甲醇冲20分钟。不过个人觉得冲10%甲醇也不必非得很长时间,估计把柱子中的盐都冲出来就行了,如果你用的时间比较短,可以增大下流速,比如从1ml增大到1.2ml或者1.5ml
药物合成
4楼2009-12-29 13:14:09
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ljh616528

金虫 (正式写手)

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一般是10倍柱体积吧,25cm长的一般会冲40分钟左右
平安是福
5楼2009-12-29 14:43:06
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limeihua11

金虫 (小有名气)

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如果是双泵的话,你可以用一个泵以100%水快速冲洗柱子,另一个甲醇同时快速冲洗这样可节省洗柱时间。
meihuali11
6楼2009-12-29 14:59:48
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zhongweixu

铁杆木虫 (著名写手)

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一般情况下20分钟够了,如果有时间,长一点也没错
7楼2009-12-29 17:08:54
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fallingash

银虫 (小有名气)

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10%甲醇稍显的高了一点,用5%以下的冲就可以,其实用纯水冲也没什么问题,现在的技术做出的柱子是能承受纯水的淋洗的.有时候系统被盐析堵的厉害了,用小流量纯水慢慢冲,很快就可以见效,加入甲醇后,效果就不太明显.
TheShawshankRedemption
8楼2009-12-29 19:58:31
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jzlyffs

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缓冲盐本身不会损坏柱子。缓冲盐留在泵里面会造成腐蚀。并且会长菌或留在泵里过夜时会析出晶体造成堵塞。照你的说法,柱子不会有问题。
建议,你每次换上百分十的甲醇后,大流量purge排一下管路的缓冲盐,这样可以大大节约冲洗柱子的时间。
9楼2009-12-29 22:19:56
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zhaoliping6060

金虫 (小有名气)

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happy169(金币+1,VIP+0):谢谢参与,欢迎常来分析版 12-30 09:16
我想知道是每一针后长时间冲洗呢,还是每天做完后再进行长时间冲洗。谢谢!
10楼2009-12-30 06:33:43
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