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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流/求助】绿色荧光蛋白的应用
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panda672

银虫 (初入文坛)

[交流] 【交流/求助】绿色荧光蛋白的应用

绿色荧光蛋白好用吗？

[ Last edited by amisking on 2009-12-28 at 19:53 ]
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1楼 2009-12-26 10:48:22
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xj22667

银虫 (小有名气)
很好用啊
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2楼2009-12-26 12:42:29
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dy_414

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
相当好用，所以说08年的NP是大奖！
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我坚信，rp是攒出来的
3楼2009-12-26 13:59:42
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
太笼统了，GFP绝对经典但是也有些问题。首先就是不是所有的融合蛋白都能正常表达。有时候会影响蛋白的正确定位。对于一些比较小的蛋白（20 30KD）因为跟GFP一样大，融合后还会影响正常的功能。
总之就是要具体问题具体分析。
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4楼2009-12-26 19:55:16
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panda672

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2009-12-26 19:55:
太笼统了，GFP绝对经典但是也有些问题。首先就是不是所有的融合蛋白都能正常表达。有时候会影响蛋白的正确定位。对于一些比较小的蛋白（20 30KD）因为跟GFP一样大，融合后还会影响正常的功能。
总之就是要具体问 ...

我的具体问题很简单：只要重组质粒表达GFP就行了，没有融合蛋白！问：那种重组质粒能携带GFP基因并很好的在头足类的受精卵中表达？要是能遗传给F2代就更好了！
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5楼2009-12-27 12:22:01
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xj22667

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们做的是首先构建一个重组载体 将GFP插在目的基因的上游 用此质粒转到细胞中 GFP可以作为一个筛选标记
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6楼2009-12-28 19:26:23
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松上云雀

木虫 (正式写手)
学习一下！
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7楼2009-12-28 20:02:26
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松上云雀

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
GFP需要在氧化状态下产生荧光,强还原剂能使GFP转变为非荧光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复.而一些弱还原剂并不影响GFP荧光.中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定,脱水剂戊二酸或甲醛等.
　　GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析.
　　但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白.
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8楼2009-12-28 20:03:32
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