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汕头大学海洋科学接受调剂
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】如果为了让头脑简单一些这么设计QPCR可以不?

我手头有32个样品,用QPCR来做双△Ct半定量一个基因,加上内参就2个基因,每个基因设3个复孔
那么就是=96*2个孔。
为了混样方便一点,能不能这么做:
因为用的是ABI那个96孔板的机器,所以就一板跑目的基因一板跑内参
分前后两次跑,再做双△Ct
我只需要获知32个样品之间的相对量而不需要知道绝对量,这么做可以不?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

那如果分开跑有没有绝对不能接受的变异呢?
两种方法的变异来源不一样而数量一致
除了样品内在的变异,都是批次间混样的误差,以及两次之间系统误差的变异。
但是产生的方式不一样

最后结果分析假设设置阈值一样取Ct,应该可以消除这部分的影响
3楼2009-12-25 22:58:47
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

我觉得还是样本和内参混跑,对照起来看,比较保险
2楼2009-12-25 22:26:46
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