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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如果为了让头脑简单一些这么设计QPCR可以不？
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】如果为了让头脑简单一些这么设计QPCR可以不？

我手头有32个样品，用QPCR来做双△Ct半定量一个基因，加上内参就2个基因，每个基因设3个复孔
那么就是=96*2个孔。
为了混样方便一点，能不能这么做：
因为用的是ABI那个96孔板的机器，所以就一板跑目的基因一板跑内参
分前后两次跑，再做双△Ct
我只需要获知32个样品之间的相对量而不需要知道绝对量，这么做可以不？
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1楼 2009-12-25 21:20:59
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
我觉得还是样本和内参混跑，对照起来看，比较保险
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2楼2009-12-25 22:26:46
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
那如果分开跑有没有绝对不能接受的变异呢？
两种方法的变异来源不一样而数量一致
除了样品内在的变异，都是批次间混样的误差，以及两次之间系统误差的变异。
但是产生的方式不一样

最后结果分析假设设置阈值一样取Ct，应该可以消除这部分的影响
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3楼2009-12-25 22:58:47
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