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an2008

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于染色体步移中出现的问题

请教大家一个问题,在染色体步移技术中出现这种情况,第一次pcr之后弥散不明显,几乎没有,第二次pcr后,弥散很严重,无条带,本来应该第一次就出现大量弥散,第二次出现明显的条带,我已经做了好久了,都是这个问题,引物也已经换了好几对了,情况都一样,究竟是什么原因呢?请高手指点一下,急!谢谢!
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gastrodia

金虫 (正式写手)

你可以使用第三对内引物继续扩增
4楼2009-12-25 14:02:10
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yangym1123

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
第二次PCR时,把模板做个浓度梯度来试试,可能是模板浓度过高!
2楼2009-12-25 12:34:26
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an2008

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by an2008 at 2009-12-24 16:08:
请教大家一个问题,在染色体步移技术中出现这种情况,第一次pcr之后弥散不明显,几乎没有,第二次pcr后,弥散很严重,无条带,本来应该第一次就出现大量弥散,第二次出现明显的条带,我已经做了好久了,都是这个问 ...

第二次也稀释过,没见有什么效果,还可能是什么原因呢?
3楼2009-12-25 13:22:07
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an2008

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-12-25 14:02:
你可以使用第三对内引物继续扩增

根据Genebank里面同源性比对之后,我现在得到的片段1000左右,猜想上游也就300左右,下游片段也就500左右,应该两次PCR就足够了吧,现在只能这么试试了,谢谢你的回复,有什么新的想法再商讨
5楼2009-12-25 17:40:30
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