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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于染色体步移中出现的问题
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an2008

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于染色体步移中出现的问题

请教大家一个问题，在染色体步移技术中出现这种情况，第一次pcr之后弥散不明显，几乎没有，第二次pcr后，弥散很严重，无条带，本来应该第一次就出现大量弥散，第二次出现明显的条带，我已经做了好久了，都是这个问题，引物也已经换了好几对了，情况都一样，究竟是什么原因呢？请高手指点一下，急！谢谢！
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1楼 2009-12-24 16:08:48
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第二次PCR时，把模板做个浓度梯度来试试，可能是模板浓度过高！
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2楼2009-12-25 12:34:26
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an2008

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by an2008 at 2009-12-24 16:08:
请教大家一个问题，在染色体步移技术中出现这种情况，第一次pcr之后弥散不明显，几乎没有，第二次pcr后，弥散很严重，无条带，本来应该第一次就出现大量弥散，第二次出现明显的条带，我已经做了好久了，都是这个问 ...

第二次也稀释过，没见有什么效果，还可能是什么原因呢？
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3楼2009-12-25 13:22:07
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gastrodia

金虫 (正式写手)
你可以使用第三对内引物继续扩增
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4楼2009-12-25 14:02:10
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an2008

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-12-25 14:02:
你可以使用第三对内引物继续扩增

根据Genebank里面同源性比对之后，我现在得到的片段1000左右，猜想上游也就300左右，下游片段也就500左右，应该两次PCR就足够了吧，现在只能这么试试了，谢谢你的回复，有什么新的想法再商讨
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5楼2009-12-25 17:40:30
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leunglm

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by an2008 at 2009-12-25 17:40:


根据Genebank里面同源性比对之后，我现在得到的片段1000左右，猜想上游也就300左右，下游片段也就500左右，应该两次PCR就足够了吧，现在只能这么试试了，谢谢你的回复，有什么新的想法再商讨

换盒子，推荐seegene的
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6楼2009-12-25 21:02:05
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