24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 551  |  回复: 7
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

十年一剑888

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR问题[已解决]

我做的是真菌,引物为ITS5和ITS4 ,提取的DNA条带清晰,杂质非常少。
但是PCR不出条带,奇怪的是:我设的阴性对照却出了个非常清晰的条带,500bp与750bp之间。反复做了好几次,都是这个结果!有同学这是引物二聚体,有些同学说不会是引物二聚体,引物二聚体不会这么大。
请问,这是什么原因造成的?

[ Last edited by 十年一剑888 on 2010-1-7 at 12:05 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
十年一剑888(金币+2,VIP+0): 1-1 10:22
将所有用到的试剂酶,都学要换了,其本身有污染,还有模板稀释后在试一下,一般原液抑制物过多。还得需要一个阳性对照。
7楼2009-12-22 22:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
十年一剑888(金币+5,VIP+0): 12-22 16:54
可以确定不是二聚体,阴性对照出带,应该是污染啊,你说的引物,对我们没有任何价值,你可以说一下你的阴性对照是什么,你要扩增的是什么
2楼2009-12-22 15:33:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十年一剑888

金虫 (小有名气)

我想扩增出真菌ITS区序列,然后回收测序。
最有可能的是哪个环节污染呢?
3楼2009-12-22 15:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
十年一剑888(金币+5,VIP+0): 12-22 16:54
这个要是查找原因,的确很是费劲,建议还是重新换试剂吧。我这里说我一个例子,我当时用质粒做PCR,当时也有过阴性出带的问题,而且我的质粒出带不是特异带,还有多余的共有带,当时也是换试剂可折腾了,但是后来发现是引物与我的未知模板有匹配的原因,仅供参考,后来一切都游刃有余了了,祝顺利!
4楼2009-12-22 16:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂学校 +12 不会吃肉 2026-04-13 14/700 2026-04-15 09:15 by 逆水乘风
[基金申请] 山东省基金2026 +7 jerry681 2026-04-08 10/500 2026-04-15 09:00 by jerry681
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 生物学调剂,一志愿西南大学348,Top期刊一区二作、二区三作,三等奖学金三次 +5 candyyyi 2026-04-09 5/250 2026-04-13 09:02 by 可淡不可忘
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 283求调剂,工科! +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 346,工科0854求调剂,专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 江苏大学 工科调剂 捡漏 +3 Evan_Liu 2026-04-09 5/250 2026-04-10 10:22 by Evan_Liu
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 招收有机化学、化工,药学,食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
信息提示
请填处理意见