24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 553  |  回复: 7
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

十年一剑888

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR问题[已解决]

我做的是真菌,引物为ITS5和ITS4 ,提取的DNA条带清晰,杂质非常少。
但是PCR不出条带,奇怪的是:我设的阴性对照却出了个非常清晰的条带,500bp与750bp之间。反复做了好几次,都是这个结果!有同学这是引物二聚体,有些同学说不会是引物二聚体,引物二聚体不会这么大。
请问,这是什么原因造成的?

[ Last edited by 十年一剑888 on 2010-1-7 at 12:05 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
十年一剑888(金币+2,VIP+0): 1-1 10:22
将所有用到的试剂酶,都学要换了,其本身有污染,还有模板稀释后在试一下,一般原液抑制物过多。还得需要一个阳性对照。
7楼2009-12-22 22:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
十年一剑888(金币+5,VIP+0): 12-22 16:54
可以确定不是二聚体,阴性对照出带,应该是污染啊,你说的引物,对我们没有任何价值,你可以说一下你的阴性对照是什么,你要扩增的是什么
2楼2009-12-22 15:33:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十年一剑888

金虫 (小有名气)

我想扩增出真菌ITS区序列,然后回收测序。
最有可能的是哪个环节污染呢?
3楼2009-12-22 15:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
十年一剑888(金币+5,VIP+0): 12-22 16:54
这个要是查找原因,的确很是费劲,建议还是重新换试剂吧。我这里说我一个例子,我当时用质粒做PCR,当时也有过阴性出带的问题,而且我的质粒出带不是特异带,还有多余的共有带,当时也是换试剂可折腾了,但是后来发现是引物与我的未知模板有匹配的原因,仅供参考,后来一切都游刃有余了了,祝顺利!
4楼2009-12-22 16:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 +6 小聂爱学习 2026-04-14 6/300 2026-04-15 17:26 by 1005715100
[考研] 材料299专硕求调剂 +17 +21 2026-04-09 17/850 2026-04-15 17:20 by zs92450
[考研] 284求调剂 +20 让我上岸吧阿西 2026-04-09 20/1000 2026-04-15 14:40 by 黑科技花岗岩
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 297,工科调剂? +7 河南农业大学-能 2026-04-14 7/350 2026-04-15 13:26 by 西北望—风沙
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所,有机化学356分找调剂 +12 Nadiums 2026-04-09 13/650 2026-04-14 17:54 by lhj2009
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂,接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
信息提示
请填处理意见