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yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】Clonetech 的RACE PCR可以不用推荐的热启动酶吗?如何手动热启动

我买了一个Clonetech的SMARTer RACE cDNA扩增盒子,发现和原来的不一样了,不再赠送Advantage polymerase了,需要单独订,可是急需要马上继续实验,不知道用普通的Taq酶行不行,如何手动热启动?望高手指点,谢谢了
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

谢谢啊,宝生物的rtaq或者extaq都可以吧
3楼2009-12-22 15:10:24
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xhlxhl

木虫 (正式写手)

★ ★
yujiaping1(金币+1,VIP+0): 12-22 15:09
yujiaping1(金币+1,VIP+0):我用exTaq做出来了,谢谢 12-23 13:43
不是必须得用Advantage polymerase的,只不过是公司的广告而已;用TAKARA的LA就可以,我用它做RACE也很亮,Taq也用过,也可以扩出来(LA扩长片段优势明显):配PCR的时候全程在冰上,等PCR仪的温度升上去了,再放上去即可手动热启动。
2楼2009-12-22 14:44:59
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hyde0706

木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-22 19:14
yujiaping1(金币+1,VIP+0):谢谢啊 12-22 19:55
可以考虑在体系里先不加镁离子,体系加热到95度时再加入镁离子,这样肯定可以保证热启动。
4楼2009-12-22 17:41:04
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shuxian1

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问你们用Clonetech SMARTer RACE做5‘有没有做出来啊,能不能发个你们操作的详细过程,最近做5’用UPM扩出的条带弥散,有很多条带,而且我的特异引物Tm是61度,不知道能不能扩出来,还是设计的特异引物Tm值必须在70度以上啊?说明书上写到Tm值在60-70度之间的可以用常规PCR,退火是68度,不知道有没有人用这个程序做出来的?谢谢各位虫友帮忙,实验很急!
我与你一起闯天下
5楼2011-08-19 09:42:59
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