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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助胰蛋白酶溶液配制方法
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Trex_H

木虫 (著名写手)

异国漂泊

[交流] 【求助/交流】求助胰蛋白酶溶液配制方法

我要使用BAEE作为生色底物来测定胰蛋白酶的活性，使用Tris-Hcl (pH=8.0）作为反应缓冲液，请教大家胰蛋白酶液怎么配制，请各位达人详细指点下配制方法及保存手段，不尽感激！！！
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1楼 2009-12-22 09:29:28
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Trex_H

木虫 (著名写手)

异国漂泊
补充注明：我的胰蛋白酶是固体粉末，我以前使用Tris-Hcl (pH=8.0）直接溶解酶，浓度约为30微克每毫升，分装存储于-20度。最开始使用的时候活性很高，就是后来差不多没有活性了，不知道怎么回事？
另外楼上0.25%是什么单位，EDTA的作用是什么？
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你在桥上看风景，看风景的人在楼上看你，明月装饰了你的窗子，你装饰了别人的梦
3楼2009-12-22 11:31:02
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢 12-22 11:17
Trex_H(金币+4,VIP+0):对我并不适用，但还是要谢谢！ 12-26 08:22
0.25%的胰酶，0.04%EDTA，溶于100mlPBS
这是我消化细胞用的胰酶配方,不知道你能不能用啊
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2楼2009-12-22 10:57:51
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yinsongna

金虫 (正式写手)
100ml，0.25g 是固体粉末的
胰酶你要是常用就放4度吧，  反复冻融不好，  至于你说的活性不高有没有其他原因我也不是很清楚
EDTA是一种螯合剂，因为细胞表面很多和培养皿结合的蛋白都是带有Ca2 或者Mg2 的蛋白，而EDTA就是螯合Ca2 或者Mg2 的，从而加速细胞和培养皿的脱离。胰酶是降解细胞表面蛋白的，而且胰酶的消化可以用血清来终止，对于EDTA，只能是尽量冲洗干净残留的EDTA
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4楼2009-12-22 13:49:27
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