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Trex_H

木虫 (著名写手)

异国漂泊

[交流] 【求助/交流】求助胰蛋白酶溶液配制方法

我要使用BAEE作为生色底物来测定胰蛋白酶的活性,使用Tris-Hcl (pH=8.0)作为反应缓冲液,请教大家胰蛋白酶液怎么配制,请各位达人详细指点下配制方法及保存手段,不尽感激!!!
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你在桥上看风景,看风景的人在楼上看你,明月装饰了你的窗子,你装饰了别人的梦
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yinsongna

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢 12-22 11:17
Trex_H(金币+4,VIP+0):对我并不适用,但还是要谢谢! 12-26 08:22
0.25%的胰酶,0.04%EDTA,溶于100mlPBS
这是我消化细胞用的胰酶配方,不知道你能不能用啊
2楼2009-12-22 10:57:51
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Trex_H

木虫 (著名写手)

异国漂泊

补充注明:我的胰蛋白酶是固体粉末,我以前使用Tris-Hcl (pH=8.0)直接溶解酶,浓度约为30微克每毫升,分装存储于-20度。最开始使用的时候活性很高,就是后来差不多没有活性了,不知道怎么回事?
另外楼上0.25%是什么单位,EDTA的作用是什么?
你在桥上看风景,看风景的人在楼上看你,明月装饰了你的窗子,你装饰了别人的梦
3楼2009-12-22 11:31:02
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yinsongna

金虫 (正式写手)

100ml,0.25g 是固体粉末的
胰酶你要是常用就放4度吧,  反复冻融不好,  至于你说的活性不高有没有其他原因我也不是很清楚
EDTA是一种螯合剂,因为细胞表面很多和培养皿结合的蛋白都是带有Ca2 或者Mg2 的蛋白,而EDTA就是螯合Ca2 或者Mg2 的,从而加速细胞和培养皿的脱离。胰酶是降解细胞表面蛋白的,而且胰酶的消化可以用血清来终止,对于EDTA,只能是尽量冲洗干净残留的EDTA
4楼2009-12-22 13:49:27
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