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haylig

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有氯霉素抗性的土壤杆菌吗，大家帮忙分析一下原因

我在做C58的基因敲除，敲除载体构建好转化C58后在氯霉素平板上筛选，但是空白在氯霉素浓度450mg/L的平板上还长菌，这个浓度太高了，我见过的氯霉素就是170mg/L最高，我的感受态为OD600＝0.5的菌液25ml收集一管200微升，电击转化，2000v，达到5ms，我同时转了别的质粒，证明这个条件能转进去；现在我怀疑它是氯霉素抗性的菌。
载体构建好做转化三个月了，一直没有筛到菌，我的同源臂有500和600bp一对，800和900bp一对，要敲除两个基因，太郁闷了，原本以为载体构建出来就能转化出突变株，有做过的给点建议，谢谢。

[ Last edited by haylig on 2009-12-21 at 21:56 ]
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1楼 2009-12-21 21:54:26
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你做之前没验证下C58是什么抗性的就构建质粒？

挽救办法也有啊，可以换个抗生素试试
载体上是氯霉素抗性么？
能不能换，自己动手修改质粒啊，理论是可行的，具体到你的质粒就不清楚了
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小木虫之有关部门负责人
2楼2009-12-21 23:54:04
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haylig

铜虫 (小有名气)
我的菌在氯霉素150mg/L的液体培养基里是不长的，但是就是在电击后能在450mg/L的平板上长，我开始时做过抗性筛选的，这个现象就是很奇怪，有什么理论解释吗？
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3楼2009-12-25 13:04:33
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