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[交流] 【求助/交流】原核表达引物问题

利用双酶切分别切载体和目的基因，然后连接，构建原核表达载体，通过pcr方法已经检测到了目的基因，并且重组质粒送去测序。请问大家：我设计的引物不包含ATG起始密码子，上游引物的3‘端在ATG中A的前面第三位，我的目的基因还能正确表达么？因为起始密码子被破坏了，

1楼 2009-12-17 21:57:33

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铁杆木虫 (正式写手)

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可以表达，但是注意酶切位点要是与载体的读码框一致，如不一致可以人工添加几个碱基，否则你的基因会发生移码突变，翻译的产物会发生完全的变话

4楼2009-12-19 10:04:28

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银虫 (小有名气)

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也可能表达，因为载体上有起始密码子，只要你所用的酶没有把他切除

3楼2009-12-19 00:17:41

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木虫 (著名写手)

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上游引物的3‘端在ATG中A的前面第三位，举个例子，是下面这种情况吗？
ATTTCGCGAATCGATG
TAAAGCGCTTA

谎言和真实在河边洗澡，谎言先洗好，穿走了真实的衣服，真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言，却很难接受赤裸裸的真实。

5楼2009-12-19 13:47:19

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