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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆的高人们！！
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zplipeng

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】基因克隆的高人们！！

基因克隆的高人们！
小弟有一个问题：
    反转录后得到的cDNA，经特异引物PCR只有一条特异带，于是想把它克隆到载体上，可以直接用PCR产物酶切连接吗？还是必须要经过琼脂糖凝胶电泳纯化后再酶切连接？感觉就这一条带，应该可以不去纯化了吧！！！！
万分感谢！！
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
1楼 2009-12-17 13:57:11
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢 12-17 17:38
zplipeng(金币+1,VIP+0):感谢！ 12-18 15:04
建议：1，纯化后转化，效率高些
      2，PCR产物难免有混合物的。还有引物二聚体，你能保证就一条带？！你引物二聚体比你的目的带更容易连接上载体
      3.你还是反转录的，MGD，那就更不能省了！！！！
      4.有的时候试验还是不能省的
希望对你有所帮助~~~~~~~~。
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2楼2009-12-17 14:42:55
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nasiyu

铜虫 (初入文坛)
xuexi
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3楼2009-12-17 15:35:32
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-17 18:20
zplipeng(金币+1,VIP+0):感谢！ 12-18 15:05
建议沉淀回收,效率一般在90%以上.酶切后一样的回收操作
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
4楼2009-12-17 15:36:00
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-17 18:20
zplipeng(金币+1,VIP+0):谢谢啊！ 12-18 15:05
纯化吧，这一步又不费时间的，呵呵免得后面搞不出来返工
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5楼2009-12-17 15:41:52
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-17 18:20
zplipeng(金币+1,VIP+0):谢谢啊！ 12-18 15:05
酶切连接就不需要纯化
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6楼2009-12-17 17:57:56
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xiangao

金虫 (正式写手)
★
zplipeng(金币+1,VIP+0):谢谢啊！ 12-18 15:05
可以不用切胶回收，直接PCR产物纯化就行
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7楼2009-12-17 18:24:20
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neon_alone

木虫 (小有名气)
其实电泳切胶回收和PCR产物纯化都可以的，不过觉得切胶回收比较保险，呵呵！
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8楼2009-12-17 19:41:15
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suiliucai

金虫 (小有名气)
看你是用什么样的载体啊，有的载体就明确指出使用PCR产物连接的，有的载体连接最好切胶回收在连接
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9楼2009-12-17 20:33:13
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louxinlong

木虫 (小有名气)
最好是电泳后回收，
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10楼2009-12-17 21:23:32
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