24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 952  |  回复: 10
当前主题已经存档。

zplipeng

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】基因克隆的高人们!!

基因克隆的高人们!
小弟有一个问题:
    反转录后得到的cDNA,经特异引物PCR只有一条特异带,于是想把它克隆到载体上,可以直接用PCR产物酶切连接吗?还是必须要经过琼脂糖凝胶电泳纯化后再酶切连接?感觉就这一条带,应该可以不去纯化了吧!!!!
万分感谢!!
回复此楼
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢 12-17 17:38
zplipeng(金币+1,VIP+0):感谢! 12-18 15:04
建议:1,纯化后转化,效率高些
      2,PCR产物难免有混合物的。还有引物二聚体,你能保证就一条带?!你引物二聚体比你的目的带更容易连接上载体
      3.你还是反转录的,MGD,那就更不能省了!!!!
      4.有的时候试验还是不能省的
希望对你有所帮助~~~~~~~~。
2楼2009-12-17 14:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nasiyu

铜虫 (初入文坛)

3楼2009-12-17 15:35:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

断弦的琴

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-17 18:20
zplipeng(金币+1,VIP+0):感谢! 12-18 15:05
建议沉淀回收,效率一般在90%以上.酶切后一样的回收操作
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
4楼2009-12-17 15:36:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzw1221

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-17 18:20
zplipeng(金币+1,VIP+0):谢谢啊! 12-18 15:05
纯化吧,这一步又不费时间的,呵呵免得后面搞不出来返工
5楼2009-12-17 15:41:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 12-17 18:20
zplipeng(金币+1,VIP+0):谢谢啊! 12-18 15:05
酶切连接就不需要纯化
6楼2009-12-17 17:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)


zplipeng(金币+1,VIP+0):谢谢啊! 12-18 15:05
可以不用切胶回收,直接PCR产物纯化就行
7楼2009-12-17 18:24:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neon_alone

木虫 (小有名气)

其实电泳切胶回收和PCR产物纯化都可以的,不过觉得切胶回收比较保险,呵呵!
8楼2009-12-17 19:41:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suiliucai

金虫 (小有名气)

看你是用什么样的载体啊,有的载体就明确指出使用PCR产物连接的,有的载体连接最好切胶回收在连接
9楼2009-12-17 20:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louxinlong

木虫 (小有名气)

最好是电泳后回收,
10楼2009-12-17 21:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zplipeng 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 通信工程求调剂!!! +7 zlb770521 2026-04-14 7/350 2026-04-19 20:56 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
信息提示
请填处理意见