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[交流]
【求助/交流】纯化乙酰胆碱酯酶过柱问题
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| 我在纯化乙酰胆碱酯酶，经过盐析后，测得酶活性很高，经过透析后也有酶活性，但是经过凝胶过滤就会出现，刚开始会出现两个峰，但是后来峰值再上升后，就再也下不来了，一直横在108左右，不知道什么原因？检测前面的峰值，酶活性很小，这会是什么原因引起的呢？后面的峰108用了将近10个小时也没下来，整个洗脱过程，我用了快一天的时间。我的缓冲液里加了0.5%的曲拉通，0.2MNaCl，还有1mMEDTA，以及相应浓度的蛋白抑制剂PMSF，PMSF会对洗脱有影响吗？我后来用不含那些物质的磷酸缓冲液洗脱，峰值就下来了。但是在后来我已加上含有以上物质的磷酸缓冲液，则峰值又上来了。是不是我的洗脱液磷酸缓冲液有问题呢？可是在过柱之前，我用同样的磷酸缓冲液平衡并且调零了呀！这是什么原因呢？ |
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