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[交流]
【求助/交流】纯化乙酰胆碱酯酶过柱问题
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| 我在纯化乙酰胆碱酯酶,经过盐析后,测得酶活性很高,经过透析后也有酶活性,但是经过凝胶过滤就会出现,刚开始会出现两个峰,但是后来峰值再上升后,就再也下不来了,一直横在108左右,不知道什么原因?检测前面的峰值,酶活性很小,这会是什么原因引起的呢?后面的峰108用了将近10个小时也没下来,整个洗脱过程,我用了快一天的时间。我的缓冲液里加了0.5%的曲拉通,0.2MNaCl,还有1mMEDTA,以及相应浓度的蛋白抑制剂PMSF,PMSF会对洗脱有影响吗?我后来用不含那些物质的磷酸缓冲液洗脱,峰值就下来了。但是在后来我已加上含有以上物质的磷酸缓冲液,则峰值又上来了。是不是我的洗脱液磷酸缓冲液有问题呢?可是在过柱之前,我用同样的磷酸缓冲液平衡并且调零了呀!这是什么原因呢? |
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