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[交流]
【求助/交流】分离碱性蛋白的非变性凝胶电泳配方
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我可能要对一个碱性蛋白之进行非变性凝胶电泳（Native-PAGE），在网上搜索到的分离碱性蛋白使用的低pH凝胶系统如下： “1. 分离胶：0.06M KOH，0.376M Ac，pH4.3（7.7% T，2.67% C）； 2. 堆积胶：0.06M KOH，0.063M Ac，pH6.8（3.125% T，25% C）； 3. 电泳缓冲液：0.14M 2-丙氨酸，0.35M Ac，pH4.5 将正负电极倒置，用甲基绿（0.002%）为示踪剂” 请问，“7.7% T，2.67% C”是什么意思？ 另外，如果大家有其它配方，也请与我分享吧  。谢谢各位了！ |
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amisking(金币+5,VIP+0):弄明白就好！ 12-19 12:40
amisking(金币+5,VIP+0):弄明白就好！ 12-19 12:40
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看来凡事还得靠自己。终于弄明白了。以下是在网上转来的： “聚合后的聚丙烯酰胺凝胶的强度、弹性、透明度、粘度和孔径大小均取决于两个重要参数T和C，T是丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺两个单体的总百分浓度。C是与T有关的交联百分浓度。T与C的计算公式是： C = 6.5－0.3T “上式中a为丙烯酰胺的克数，b为甲叉双丙烯酰胺的克数，m为水或缓冲液体积（ml）。式中a与b的比例很重要。富有弹性，且完全透明的凝胶，a与b的重量比应在30左右。选择T和C的经验公式是： “此式可用于计算T为5％～20％时的凝胶组成。C值并不很严格，在大多数情况下，可变化的范围约为 ±1％，当C保持恒定时，凝胶的有效孔径随着T的增加而减小，当T保持恒定，C为4％时，有效孔径最小，C大于或小于4％时，有效孔径均变大，C大于5％时凝胶变脆，不宜使用，实验中最常用的C是2.6％和3％。” |
2楼2009-12-19 12:35:51