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[交流]
【求助/交流】分离碱性蛋白的非变性凝胶电泳配方
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我可能要对一个碱性蛋白之进行非变性凝胶电泳(Native-PAGE),在网上搜索到的分离碱性蛋白使用的低pH凝胶系统如下: “1. 分离胶:0.06M KOH,0.376M Ac,pH4.3(7.7% T,2.67% C); 2. 堆积胶:0.06M KOH,0.063M Ac,pH6.8(3.125% T,25% C); 3. 电泳缓冲液:0.14M 2-丙氨酸,0.35M Ac,pH4.5 将正负电极倒置,用甲基绿(0.002%)为示踪剂” 请问,“7.7% T,2.67% C”是什么意思? 另外,如果大家有其它配方,也请与我分享吧 。谢谢各位了! |
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amisking(金币+5,VIP+0):弄明白就好! 12-19 12:40
amisking(金币+5,VIP+0):弄明白就好! 12-19 12:40
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看来凡事还得靠自己。终于弄明白了。以下是在网上转来的: “聚合后的聚丙烯酰胺凝胶的强度、弹性、透明度、粘度和孔径大小均取决于两个重要参数T和C,T是丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺两个单体的总百分浓度。C是与T有关的交联百分浓度。T与C的计算公式是: C = 6.5-0.3T “上式中a为丙烯酰胺的克数,b为甲叉双丙烯酰胺的克数,m为水或缓冲液体积(ml)。式中a与b的比例很重要。富有弹性,且完全透明的凝胶,a与b的重量比应在30左右。选择T和C的经验公式是: “此式可用于计算T为5%~20%时的凝胶组成。C值并不很严格,在大多数情况下,可变化的范围约为 ±1%,当C保持恒定时,凝胶的有效孔径随着T的增加而减小,当T保持恒定,C为4%时,有效孔径最小,C大于或小于4%时,有效孔径均变大,C大于5%时凝胶变脆,不宜使用,实验中最常用的C是2.6%和3%。” |

2楼2009-12-19 12:35:51











。谢谢各位了!
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