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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急啊，PCR
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急啊，PCR

各位好，Marker右边两个的基因组影响PCR效果么？是植物的
非常感谢啊，p不出来啊
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1楼 2009-12-14 19:35:56
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caocaomu

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢 12-14 20:36
Maker右边的12跟34浓度差不多，也都有RNA没除，如果一点都括不出来的话试试不同的模板浓度，把母液吸出2UL，加18UL水，然后在PCR时分别以1，3，5，7UL做不同的浓度梯度看看能否括得出来。
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2楼2009-12-14 20:24:29
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xyls6868

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by caocaomu at 2009-12-14 20:24:
Maker右边的12跟34浓度差不多，也都有RNA没除，如果一点都括不出来的话试试不同的模板浓度，把母液吸出2UL，加18UL水，然后在PCR时分别以1，3，5，7UL做不同的浓度梯度看看能否括得出来。

这意思是说模板的浓度有问题吗？
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3楼2009-12-14 20:30:27
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won7

金虫 (小有名气)
你的模板问题不大，按caocaomu  的建议在做PCR时做模板梯度，如果出不来，那检查的的PCR试剂和引物是否有问题。
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4楼2009-12-14 22:23:39
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yiyiglad

同意1楼的说法，我觉得最主要的就是模板浓度的问题
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5楼2009-12-14 23:18:33
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xyls6868 at 2009-12-14 20:30:

这意思是说模板的浓度有问题吗？

谢谢！我问了一些人，说我的模板降解了不少，可是？如果降解了，影响大么？
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6楼2009-12-15 08:48:13
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 青青草hwj at 2009-12-14 19:35:
各位好，Marker右边两个的基因组影响PCR效果么？是植物的
非常感谢啊，p不出来啊

谢谢！那其他酶等的加的量和平时差不多么？引物7.5UM大概加多少？10um dNTP呢？20ul的反应体系，谢谢啦,那两个对结果影响大么？我做了不少改变那两个的都没有反应
非常感谢
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7楼2009-12-15 08:51:32
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 青青草hwj at 2009-12-14 19:35:
各位好，Marker右边两个的基因组影响PCR效果么？是植物的
非常感谢啊，p不出来啊

琼脂糖电泳的胶浓度影响大么？
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8楼2009-12-15 09:08:03
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 青青草hwj at 2009-12-14 19:35:
各位好，Marker右边两个的基因组影响PCR效果么？是植物的
非常感谢啊，p不出来啊

Marker左边两条带就是dNTP 1UL 引物1.5ul P出来的，条带很暗，上样6ul的
谢谢啊
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9楼2009-12-15 09:10:03
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Sarah_Shy

木虫 (小有名气)
额。。。这样的模板还叫没问题？你还是先把模板质量提高点再做PCR吧。
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10楼2009-12-15 18:38:32
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