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汕头大学海洋科学接受调剂
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

[交流] 【求助/交流】引物问题

问问虫友们,我所订购的PCR套装要求引物浓度是20uM,如果我把引物稀释到10uM使用,会不会严重影响实验结果?另外,PCR退火温度一般在54℃吧?但是我的引物Tm值本身已偏小,在55℃左右,那么按照退火温度要比最小Tm还要小5℃的原则,我能不能将退火温度设定在50度呢?时间又该是多长呢?
有没有达人,能给份关于PCR的比较详细的步骤和注意事项清单,心得体会为主的。多谢啦!
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不忘初心,为梦远行。
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ln0401

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般试验中引物的使用都是过量的,稀释使用应该不会严重影响实验结果,只是产物浓度的高低;至于退火温度可以做一下温度梯度PCR
2楼2009-12-11 09:24:12
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
psr什么套装
加2倍量不就可以了
原则是死的
时间半分钟
没什么体会
或者是我做的太容易的
只要引物行,都p出来的
3楼2009-12-11 09:28:29
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