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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白纯化
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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化

大家都是怎样作纯化的呢？
最近准备做通过原核表达得到的蛋白，这是个可溶性蛋白，纯化后还需要做功能研究，我准备过镍柱纯化
有看到Novagen有蛋白纯化试剂盒，不知道具体是个怎么回事
有没有做过的人介绍一下经验啊
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1楼 2009-12-09 21:50:38
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ln0401

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-12-11 13:57:

如果大量纯化的话，不是应该买大一点的柱子吗？
能说的详细一些吗？

你说的大量是多少呢？我1L培养基得到的表达量较高的蛋白就用1ml树脂来亲和层析，就能得到浓度高而纯的蛋白，且穿流里只有少部分未结合的目标蛋白。你的实验过程中需要很大量的蛋白质吗？既然是做蛋白质结构功能方面的研究，我想蛋白质提纯后也不要放置太久，否则蛋白质结构发生了变化就会影响实验结果。
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13楼2009-12-14 09:41:10
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
顶一下希望楼主早日得到答案
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
3楼2009-12-09 23:06:40
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蛋白要带纯化标签才能用亲和层析
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4楼2009-12-10 08:13:36
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黑罕

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最近准备做通过原核表达得到的蛋白，这是个可溶性蛋白
什么意思，还没做怎么知道是可溶的，而不是包涵体
纯化后还需要做功能研究 这个对纯度和量要求并不高
过镍柱纯化，建议先看看找本pET表达手册看看，就明白了
最好看英文的，中文的也翻译的不错。
本网站就有，你搜搜吧
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5楼2009-12-10 08:18:32
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