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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化

大家都是怎样作纯化的呢?
最近准备做通过原核表达得到的蛋白,这是个可溶性蛋白,纯化后还需要做功能研究,我准备过镍柱纯化
有看到Novagen有蛋白纯化试剂盒,不知道具体是个怎么回事
有没有做过的人介绍一下经验啊
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

米有做过
2楼2009-12-09 23:01:39
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
顶一下希望楼主早日得到答案
将有能量帮助他人作为自己的人生追求!
3楼2009-12-09 23:06:40
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
蛋白要带纯化标签才能用亲和层析
4楼2009-12-10 08:13:36
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黑罕

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最近准备做通过原核表达得到的蛋白,这是个可溶性蛋白
什么意思,还没做怎么知道是可溶的,而不是包涵体
纯化后还需要做功能研究 这个对纯度和量要求并不高
过镍柱纯化,建议先看看找本pET表达手册看看,就明白了
最好看英文的,中文的也翻译的不错。
本网站就有,你搜搜吧
5楼2009-12-10 08:18:32
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
大家快来帮助楼主啊
6楼2009-12-10 08:59:10
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一只鱼ddtt

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的这个蛋白是重组蛋白吗?载体是pet系列吗?如果用镍柱亲和层析纯化蛋白,必须是载体上带有组氨酸标签,你要是做蛋白的功能研究的话,你就得做镍柱的大量纯化才行,得过柱子。我建议你先小量纯化体系试试。
做个有风度的人
7楼2009-12-10 16:13:56
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小白3521

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 一只鱼ddtt at 2009-12-10 16:13:
你的这个蛋白是重组蛋白吗?载体是pet系列吗?如果用镍柱亲和层析纯化蛋白,必须是载体上带有组氨酸标签,你要是做蛋白的功能研究的话,你就得做镍柱的大量纯化才行,得过柱子。我建议你先小量纯化体系试试。

谢谢,是重组蛋白,PET30a载体
8楼2009-12-11 08:47:16
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ln0401

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也在做蛋白功能研究,所用载体是PET-28a,我觉得GE的NAT-Ni树脂的亲和力很高,2ml 树脂足够用来纯化你实验所需蛋白
9楼2009-12-11 09:38:55
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小白3521

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ln0401 at 2009-12-11 09:38:
我也在做蛋白功能研究,所用载体是PET-28a,我觉得GE的NAT-Ni树脂的亲和力很高,2ml 树脂足够用来纯化你实验所需蛋白

如果大量纯化的话,不是应该买大一点的柱子吗?
能说的详细一些吗?
10楼2009-12-11 13:57:45
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