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汕头大学海洋科学接受调剂
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

我用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,经过多次测定在0~100μg/mL范围内牛血清白蛋白标准曲线的R的平方值最高只有0.98,而在20~60μg/mL范围内平均可以达到0.999以上,怎样才能使整体曲线的R的平方值提高?

谢谢!!!

[ Last edited by jackchen129 on 2009-12-8 at 16:20 ]
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qiang84zhang

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 12-8 21:52
我觉得主要是问题可能是染液或者是样品加的量是否准确!
单就染液来说,考量G-250溶液是要过滤的,再谈下反应时间,一般要在两分钟之后,并且要振荡混匀,这个也很重要!
大家都知道,没有两个9以上,这个标线的可信度是不行的,换句话说,就是你的蛋白量会测得不准!
4楼2009-12-08 21:40:55
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tianpingpe

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
将你标准蛋白的浓度梯度调节一下,同时操作时候尽量减少误差
2楼2009-12-08 15:17:40
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shubin20028376

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以分段拟合标曲,比如20~60ug/ml一段60~100ug/ml一段。计算样品含量的时候根据测得的OD值决定代入哪一个方程。

另外,标曲的拟合不一定要采用直线方程,比如可以在Excel里面添加趋势线的时候选取指数或对数方程,根据回归系数选择较满意的标曲方程。
3楼2009-12-08 21:00:30
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