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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

我用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，经过多次测定在0~100μg/mL范围内牛血清白蛋白标准曲线的R的平方值最高只有0.98，而在20~60μg/mL范围内平均可以达到0.999以上，怎样才能使整体曲线的R的平方值提高？

谢谢！！！

[ Last edited by jackchen129 on 2009-12-8 at 16:20 ]
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1楼 2009-12-08 14:57:44
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tianpingpe

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
将你标准蛋白的浓度梯度调节一下，同时操作时候尽量减少误差
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2楼2009-12-08 15:17:40
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shubin20028376

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以分段拟合标曲，比如20~60ug/ml一段60~100ug/ml一段。计算样品含量的时候根据测得的OD值决定代入哪一个方程。

另外，标曲的拟合不一定要采用直线方程，比如可以在Excel里面添加趋势线的时候选取指数或对数方程，根据回归系数选择较满意的标曲方程。
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3楼2009-12-08 21:00:30
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qiang84zhang

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-8 21:52
我觉得主要是问题可能是染液或者是样品加的量是否准确！
单就染液来说，考量G-250溶液是要过滤的，再谈下反应时间，一般要在两分钟之后，并且要振荡混匀，这个也很重要！
大家都知道，没有两个9以上，这个标线的可信度是不行的，换句话说，就是你的蛋白量会测得不准！
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4楼2009-12-08 21:40:55
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