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[交流]
【求助/交流】研究蛋白质相互作用的以下两个实验方法有啥优缺点？
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研究蛋白质相互作用的下面两个实验方法相比较，各有什么优缺点？ 酵母双杂交技术和免疫共沉淀法。 另外，还有什么相关的研究方法？ |
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bbyu007
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3楼2009-12-08 10:07:02
zhuifeng7000
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spiderboy(金币+4,VIP+0):非常全面。。谢谢 12-8 21:09
spiderboy(金币+4,VIP+0):非常全面。。谢谢 12-8 21:09
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Two-Hybrid的优点： 1是酵母细胞内的in vivo相互作用。 2只需要cDNA，简单。 3弱的相互作用也能检测到。 Two-Hybrid的缺点： 1都是融合蛋白，万一融合出新的相互作用。 2酵母的翻译后修饰不尽相同。尤其是蛋白质的调控性修饰。 3自身激活报告基因。 4都基因库的要求比较高，单向1/3是in frame 5蛋白质毒性。 6第三者Z插足介导的相互作用。 7假阳性。 免疫共沉淀优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态； （2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响； （3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用； (2) 两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用； (3) 必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。 其实检测蛋白质之间相互作用的方法很多，还有GST pull down、蛋白质亲和层析、荧光共振能量转移等。 |
2楼2009-12-07 23:00:39
bbyu007
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4楼2009-12-09 11:10:20
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5楼2009-12-21 14:41:10
