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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】研究蛋白质相互作用的以下两个实验方法有啥优缺点？
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spiderboy

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】研究蛋白质相互作用的以下两个实验方法有啥优缺点？

研究蛋白质相互作用的下面两个实验方法相比较，各有什么优缺点？
酵母双杂交技术和免疫共沉淀法。

另外，还有什么相关的研究方法？
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1楼 2009-12-07 21:22:39
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
spiderboy(金币+4,VIP+0):非常全面。。谢谢 12-8 21:09
引用回帖:
Originally posted by spiderboy at 2009-12-7 21:22:
研究蛋白质相互作用的下面两个实验方法相比较，各有什么优缺点？
酵母双杂交技术和免疫共沉淀法。

另外，还有什么相关的研究方法？

Two-Hybrid的优点：
1是酵母细胞内的in vivo相互作用。
2只需要cDNA，简单。
3弱的相互作用也能检测到。
Two-Hybrid的缺点：
1都是融合蛋白，万一融合出新的相互作用。
2酵母的翻译后修饰不尽相同。尤其是蛋白质的调控性修饰。
3自身激活报告基因。
4都基因库的要求比较高，单向1/3是in frame
5蛋白质毒性。
6第三者Z插足介导的相互作用。
7假阳性。
免疫共沉淀优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；
   （2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；
           （3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
    缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；
(2)  两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；
(3)  必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。

其实检测蛋白质之间相互作用的方法很多，还有GST pull down、蛋白质亲和层析、荧光共振能量转移等。
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2楼2009-12-07 23:00:39
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
spiderboy(金币+1,VIP+0):能具体说明一下吗？ 12-8 21:10
还有，双分子荧光互补。
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我是笨笨鱼~~~
3楼2009-12-08 10:07:02
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
双分子荧光互补：
蛋白A+一半YFP  蛋白B+另一半YFP，如果AB有相互作用，那么就将形成一个完整的YFP，在荧光显微镜下就能观察到自发荧光。
赞一下(1人) 回复此楼
我是笨笨鱼~~~
4楼2009-12-09 11:10:20
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shizhuang1985

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
使用核磁共振滴定实验，观察目的蛋白是否被影响，这也可以检测是否有相互作用。
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5楼2009-12-21 14:41:10
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conbu

铜虫 (小有名气)
有没有 做蛋白质相互作用数据库的？
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公选论坛 http://www.gwyquan.com/
6楼2010-01-13 15:15:34
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