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guojing0000

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】紧急求助关于SDS-PAGE电泳中出现的问题(带图)

我最近在做SDS-PAGE,一直做出来的效果都不理想,想请教大家几个问题:
1. 我在电泳过程中发现样品在浓缩胶中还是一条,但是进入分离胶以后就不在是一个薄薄的的带,而是变成了一个厚厚的蓝色的带,请问这样正常吗?我也不知道是什么原因造成的,很迷惑
2. 我要电泳的蛋白质分子量比较小,10-40KD,这是分离胶的配置中需要6M的尿素吗?
3. 我电泳完的胶发现一个特别迷惑的问题。就是前面的带都好好的面比较清晰,但是到后面就特别不清晰了,(如图),想知道这是什么问题
4. 请我我一般改用多大的电流电压跑比较好啊?我定电流8MA效果也不好,定电压140V效果也不好,很迷惑
希望大家给与我多多的指点,我实在是不懂啊~谢谢各位了

[ Last edited by guojing0000 on 2009-12-6 at 13:14 ]
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add_water

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
偶还米做过
不过可能要做,米人教啊
不过不是蛋白
2楼2009-12-06 19:01:44
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tianpingpe

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1.你说的那个很厚的蓝色是不是溴酚蓝的颜色,其实在分离胶会有的奇怪也是很正常的,有的时候我们也是这样,但是跑出来的蛋白条带很正常。
2.你电泳的电压有点高啊,一般是浓缩胶的时候恒压80v,分离胶恒压100v。
3.你的蛋白比较小的,提高你的胶浓度。
3楼2009-12-07 10:25:02
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