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7606

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助DNA杂交实验方法?

我现在在做DNA实验,想将两条DNA链进行杂交,不知道该如何操作?
  我的DNA链序列为5′-ACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3′ ,
其互补链序列是:5′-ACCTTCCTCCGCAATACTCCCCCAGGT-3′,
已经知道它们的Tm(1MNa+)80.8,Tm(50mMNa+)=59.2,
请教要在怎样的条件下(如缓冲溶液,离子强度介质、温度时间等条件)才能将这两条链杂交?具体是怎么操作呢?

本人是外行,从没有做过DNA方面的实验,请教各位朋友,希望大家能帮帮忙!

[ Last edited by amisking on 2009-12-4 at 20:07 ]
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
7606(金币+5,VIP+0):谢谢!我先试一试! 12-6 18:40
(1)把DNA 单链溶解于 10mM Tris, 1mM EDTA, 50 mM NaCl (pH=8.0) 溶液中。
(2)1:1混合两条互补单链。
(3)95度加热5min, 然后放到常温下,让它自然冷却,等完全冷却到室温,就可以形成互补双链了。
5楼2009-12-05 00:18:36
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fuhui1108

木虫 (正式写手)

小害虫


7606(金币+1,VIP+0):什么是质粒方法、鸟枪方法啊? 12-6 18:39
质粒是一种方法,要一定的技术含量
还有就是用鸟枪法但是成功率很低,要有耐性作哦!
小害虫
3楼2009-12-04 20:09:54
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mever

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
7606(金币+5,VIP+0):谢谢!我先试一试! 12-6 18:40
只是两条单链DNA杂交形成双链的话
不用特殊的缓冲液
用水分别溶解两条单链
混合溶液 在沸水中加热10min
缓慢冷却到室温
就行了
4楼2009-12-04 20:45:24
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