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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助DNA杂交实验方法？
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7606

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助DNA杂交实验方法？

我现在在做DNA实验，想将两条DNA链进行杂交，不知道该如何操作？
  我的DNA链序列为5′-ACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3′ ,
其互补链序列是：5′-ACCTTCCTCCGCAATACTCCCCCAGGT-3′,
已经知道它们的Tm(1MNa+)80.8,Tm(50mMNa+)=59.2，
请教要在怎样的条件下（如缓冲溶液，离子强度介质、温度时间等条件）才能将这两条链杂交？具体是怎么操作呢？

本人是外行，从没有做过DNA方面的实验，请教各位朋友，希望大家能帮帮忙！

[ Last edited by amisking on 2009-12-4 at 20:07 ]
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1楼 2009-12-04 19:30:36
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hbwang6391

木虫 (著名写手)

忽忽家族觉糖主
★
7606(金币+1,VIP+0):什么质粒 啊？ 12-6 18:39
质粒？
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笑笑别人，让别人笑笑，笑笑自己
2楼2009-12-04 19:48:07
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fuhui1108

木虫 (正式写手)

小害虫
★
7606(金币+1,VIP+0):什么是质粒方法、鸟枪方法啊？ 12-6 18:39
质粒是一种方法,要一定的技术含量
还有就是用鸟枪法但是成功率很低,要有耐性作哦!
赞一下(4人) 回复此楼
小害虫
3楼2009-12-04 20:09:54
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mever

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
7606(金币+5,VIP+0):谢谢！我先试一试！ 12-6 18:40
只是两条单链DNA杂交形成双链的话
不用特殊的缓冲液
用水分别溶解两条单链
混合溶液 在沸水中加热10min
缓慢冷却到室温
就行了
赞一下(4人) 回复此楼
4楼2009-12-04 20:45:24
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qingfengwu

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
7606(金币+5,VIP+0):谢谢！我先试一试！ 12-6 18:40
（1）把DNA 单链溶解于 10mM Tris, 1mM EDTA, 50 mM NaCl (pH=8.0) 溶液中。
（2）1：1混合两条互补单链。
（3）95度加热5min， 然后放到常温下，让它自然冷却，等完全冷却到室温，就可以形成互补双链了。
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5楼2009-12-05 00:18:36
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