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kuuikaifeng

[交流] 求助:质粒酶切相关问题!!

请教大家一个问题,我问同学要了个1301的质粒,用BglII 和EcoRI切出4条带来,本来应该两条带。而且我可以保证酶切是完全的。可同学说他给我的质粒没问题,前几天他用还是好的。高手给解决一下吧

[ Last edited by amisking on 2009-12-3 at 22:32 ]
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
kuuikaifeng(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1,VIP+0): 12-3 22:32
原始质粒或者构建好的质粒上有4个酶切位点吧,或者切的不好,酶出现了星号活性
2楼2009-12-03 21:15:51
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竹子2225

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
kuuikaifeng(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0): 12-3 22:32
有可能是酶切不完全吗,也就是没有完全切开的质粒的带  切开的含有目的基因的质粒带  还有就是部分双酶切的目的基因和去基因质粒的带....但我不确定会不会这样...
3楼2009-12-03 21:34:25
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smurfen

至尊木虫 (著名写手)


kuuikaifeng(金币+1):谢谢参与
哪个公司的酶哦
换个试试吧
Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
4楼2009-12-03 21:46:04
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zhubingbao

木虫 (小有名气)

默默向前

可能是酶切不完全
5楼2009-12-03 23:39:46
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切不完全,基本可以这样确定,下次你把质粒量减少,酶切时间延长,看看,再有,给你个trick,37°酶切完后,你放在65°5分钟,然后马上放冰上,最后加loading buffer,跑胶的效果非常好 ,成图效果是很完美的,咱做实验就是要追求完美~
6楼2009-12-04 09:55:58
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liyong1981

金虫 (正式写手)


道理大家都懂,我就不说了。希望你试验成功
7楼2009-12-04 09:56:48
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leannele

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我认为酶切的体系和时间很重要。建议准确测量质粒的浓度,根据说明书来确定反应体系。
8楼2009-12-12 21:55:16
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