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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

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[交流] 【交流/求助】关于琼脂糖电泳的问题

本人将pTrc99a质粒电转到E.coli中，用amp的LB板培养，可以长出菌落，然后挑单菌落转点，最后用ECOR I和ECOR V进行酶切鉴定，结果电泳并没有出现条带

[ Last edited by amisking on 2009-12-11 at 22:47 ]

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严于律己，宽以待人

1楼 2009-12-03 20:12:48

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jlzkchong

新虫 (初入文坛)

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专业: 生化与分子生物

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

首先要确定你的酶切反应条件合理，主要就是酶切温度和酶切时间
确保好这两点，若像你说的质粒提取的浓度在100左右的话，就排除质粒浓度太低的因素，这样我怀疑你前期PCR过程中，酶切位点突变了，你可以在目的片段和载体上面找几个酶切位点单酶切验证一下，看看是不是酶切位点发生突变，若是这种原因，那么你需要重新做PCR扩增目的条带，或者需要重新设计引物~