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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

[交流] 【交流/求助】关于琼脂糖电泳的问题

本人将pTrc99a质粒电转到E.coli中,用amp的LB板培养,可以长出菌落,然后挑单菌落转点,最后用ECOR I和ECOR V进行酶切鉴定,结果电泳并没有出现条带

[ Last edited by amisking on 2009-12-11 at 22:47 ]
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严于律己,宽以待人
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jlzkchong

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先要确定你的酶切反应条件合理,主要就是酶切温度和酶切时间
确保好这两点,若像你说的质粒提取的浓度在100左右的话,就排除质粒浓度太低的因素,这样我怀疑你前期PCR过程中,酶切位点突变了,你可以在目的片段和载体上面找几个酶切位点单酶切验证一下,看看是不是酶切位点发生突变,若是这种原因,那么你需要重新做PCR扩增目的条带,或者需要重新设计引物~
16楼2009-12-09 20:35:09
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
挑单菌落转点是什么意思?抽出来的质粒浓度怎么样?
2楼2009-12-03 21:20:29
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竹子2225

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有可能是质粒的浓度太低,也可能是胶做的太薄,样品没有加进去...
3楼2009-12-03 21:30:07
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hlp0226

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议先检测提取的质粒浓度及质量,然后再酶切检测
4楼2009-12-04 09:01:34
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