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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR高手请进，有问题求教，急！
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陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] PCR高手请进，有问题求教，急！

师姐要做菌种鉴定，用真菌的通用引物ITS1、ITS4，P出来很诡异的结果：本来是在500-700之间出现单一的条带，可是在2000-1000之前出现了弥散状条带，TD-PCR，普通PCR的结果都是如此，实在没辙了，师姐很崩溃，我也很郁闷！条件、反应体系都是我帮她设的，经过前人的验证没有问题，师姐自己加的样，想不明白问题到底出在那个环节，还希望各位高手赐教！

本帖关键词：PCR 真菌 师姐 菌种 引物
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1楼 2009-12-03 10:29:19
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陈思容

铜虫 (正式写手)
在线等，不要沉了
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2楼2009-12-03 11:04:44
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是基因组提的不好，里面还含有杂蛋白，导致出现弥散状条带？
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3楼2009-12-03 11:30:37
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-12-3 11:30:
是不是基因组提的不好，里面还含有杂蛋白，导致出现弥散状条带？

应该不是杂蛋白的问题，还有没有其他的可能？
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4楼2009-12-03 11:50:59
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一只鱼ddtt

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0): 12-3 22:35
你这个真菌是不是比较特殊，我最近细菌鉴定时也出现这样的问题，本该出现一条带，结果出现了意想不到的几条，体系和条件也是别人验证过的，后来做了细菌涂布纯化，发现该菌有三种不同的形态，但绝不是被污染了，老师说有可能是一个菌的多种形态，也可能是复合菌株，所以我建议你用普通的方法先鉴定一下你的菌，不行就切胶回收测序。
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做个有风度的人
5楼2009-12-03 14:48:49
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 一只鱼ddtt at 2009-12-3 14:48:
你这个真菌是不是比较特殊，我最近细菌鉴定时也出现这样的问题，本该出现一条带，结果出现了意想不到的几条，体系和条件也是别人验证过的，后来做了细菌涂布纯化，发现该菌有三种不同的形态，但绝不是被污染了，老 ...

谢谢，P出来时一片弥散的条带，特异性不高，尝试加DMSO等增加特异性的东西吧
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6楼2009-12-03 16:50:52
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陈思容

铜虫 (正式写手)
amisking(金币+0,VIP+0):恭喜，解除置顶！ 12-3 22:36
先在这里谢谢大家了，我们终于P出来了，56°退火温度，关键的是加入DMSO，这大概是增加了特异性吧，说不清楚，反正出来的条带很漂亮！再次谢谢大家
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7楼2009-12-03 19:32:13
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