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cui00008

银虫 (初入文坛)

[交流] DNA模板 电泳都没有条带?

1%的琼脂糖电泳,缓冲液0.5X的TBE,染色剂用goldview一型的,跑出来marker比较淡,goldview二型的,marker比较亮,但是很模糊,条带不清晰。上样都是5ul。是哪里有问题?

加样DNA模板5ul,没加上样缓冲液,跑了多次都没看见条带。怎么回事呢?

模板DNA是从别处购买的,-80°冰箱放置一年了,期间有几次断电,会不会失活了?

本帖关键词:marker TBE 电泳 DNA 冰箱
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小小豆豆

金虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 12-3 17:41
电泳缓冲液是新的吗,用新的缓冲液试过吗
2楼2009-12-03 09:43:47
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3,VIP+0):有道理 12-3 17:41
原因分析
1.制胶的问题
2.缓冲液更换
3.你的maker都比较淡,说明电泳的问题很大,另:你的模板估计浓度很低~
希望对有有所帮助
3楼2009-12-03 10:01:51
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一只鱼ddtt

银虫 (小有名气)


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支持楼上说的,制胶的时候一定让胶充分溶好。
做个有风度的人
4楼2009-12-03 14:42:06
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


1949stone(金币+1,VIP+0): 12-3 17:41
没加上样缓冲液?什么意思,不加上样缓冲液样品会沉到加样孔里吗,这样跑胶也许就不匀了吧。
5楼2009-12-03 15:57:30
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ychh521

木虫 (小有名气)


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胶要充分凝固,应该用上样缓冲液的,不然DNA不会沉下去的,可以用EB做个对照,看是不是goldview的问题。
6楼2009-12-03 18:12:45
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j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不加上样缓冲液DNA沉不到空里去,怎么会跑出带来
条带模糊,但很亮?凝胶成像仪照图的时候调一下焦距试试
修炼ing,当虫仙……
7楼2009-12-03 19:38:58
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xiongxiong5900

木虫 (小有名气)


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1.溶胶不充分
2.更换TBE
3.要加上样buffer,不然DNA会飘到TBE中,进不了胶的
4.也许是goldview的原因,效果确实不如EB
8楼2009-12-04 10:35:52
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