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求问如何筛选确定G418抗性的GS115转化子并确定整合入GS115基因组的外源基因拷贝数
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今年开始做纤维素酶在毕赤酵母中的表达实验，还是完全的新手。最近进行到G418抗性筛选，看很多文献中都是说直接将转化子涂布到不同G418浓度的平板上就可以得到不同抗性的转化子。但在实际实验中，在较低G418浓度的平板上长出的转化子不仅有只能抗此浓度G418浓度的单菌，也包括能抗更高浓度G418的单菌。为了确定转化子抗性，将从不同抗性平板上得到的单菌依次点种到浓度由低到高的G418平板上，但可能由于点取的菌种密度过高，最后所有G418浓度的平板上均长出了单菌，未按照预想获得确定G418抗性的单菌。有些文献中有用荧光PCR，定量blot，southern 杂交等方法确定插入片段的拷贝数，但由于实验室条件限制，并不容易实现。在此向各位请教，有没有其他简易的方法可以筛选到确定G418抗性的转化子，确定整合入GS115基因组的外源基因拷贝数？可否传授下经验？如果有经验丰富的前辈，能不能留个联系方式大家互相交流下，本人将感激不尽！ 本帖关键词：GS115 G418抗性 拷贝数 |
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zhaocy8903
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4楼2009-12-02 20:15:02
