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汕头大学海洋科学接受调剂
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yoyoyehan

[交流] 关于原核表达

最近做原核表达,载体是pET28,宝生物的XbaI和XhoI双酶切后用infusion与目的片段连接,涂KaNa的培养基,也长出了菌落,但是菌落pcr却p不出来东西,请各位虫友帮忙指点指点,
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paulajjh

木虫 (著名写手)

支持2楼观点,另外,你的链接时间也长一些好 了。这中情况,我一般切5个小时(当然也要看你的酶量)。连18小时
3楼2009-12-01 16:58:59
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lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-1 13:06
楼主用的两个内切酶效率都不是很高,请延长酶切时间(3小时以上吧),可能是载体自连。

不太明白infusion的意思,直接用PCR产物做酶切请在前面加保护碱基或者先把产物连进T载再做酶切。

PET28是低拷贝质粒,请保证载体的浓度,当然片段也是一样。
2楼2009-12-01 12:13:05
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