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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于原核表达
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yoyoyehan

[交流] 关于原核表达

最近做原核表达，载体是pET28，宝生物的XbaI和XhoI双酶切后用infusion与目的片段连接，涂KaNa的培养基，也长出了菌落，但是菌落pcr却p不出来东西，请各位虫友帮忙指点指点，
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1楼 2009-12-01 11:05:18
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-1 13:06
楼主用的两个内切酶效率都不是很高，请延长酶切时间（3小时以上吧），可能是载体自连。

不太明白infusion的意思，直接用PCR产物做酶切请在前面加保护碱基或者先把产物连进T载再做酶切。

PET28是低拷贝质粒，请保证载体的浓度，当然片段也是一样。
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2楼2009-12-01 12:13:05
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paulajjh

木虫 (著名写手)
支持2楼观点，另外，你的链接时间也长一些好 了。这中情况，我一般切5个小时（当然也要看你的酶量）。连18小时
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3楼2009-12-01 16:58:59
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