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zier1011

木虫 (著名写手)

[交流] 培养基灭菌的问题

一本美国人k巴克编的由科学出版社出版的<分子生物学实验工作手册>上是这样认为的:灭菌培养基的ph不能高于7.5.必须在中性条件下灭菌,待溶液冷却后再用无菌的碱调节ph.没办法,科学来不得偷懒!我曾经配过ph8.0的LB,但是高压灭菌后再测实际只有7.8左右.所以别人说得还是有道理的.还有不要在ph6.0以下灭菌琼脂溶液.含有矿物盐的溶液不能和琼脂一起灭菌.葡萄糖不能和含有氨基酸/蛋白胨或者磷酸盐的组分一起灭菌.磷酸盐不能和含有氨基酸/蛋白胨或者其他矿物盐溶液一起灭菌.

    上面一段文字是在别处看到的,发到这里大家看看,也是想请教一下大家,有没有知道问什么灭菌培养基的ph不能高于7.5?还有葡萄糖和磷酸盐会发生什么反应,本人曾做过实验,培养基中只是含葡萄糖、蛋白胨时,115度灭菌后颜色变化不是很大,但如果加了磷酸盐缓冲液,颜色变化就会比较大,一直不知道为什么,请大家不吝赐教!
     或者哪位XDJM有<分子生物学实验工作手册>的话,希望能够分享一下,先谢谢了!也可以发我信箱yeekaa003@163.com
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花还香香的
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pph0259

木虫 (正式写手)

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amisking(金币+0,VIP+0):2 12-1 12:18
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 12-1 19:44
我只知道灭菌会导致PH值降低!
实际中,我用缓冲调培养基的ph,但灭菌后,ph面目全非!!所以,人家的说法是对的!
2楼2009-12-01 09:46:00
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lllk2008

木虫 (小有名气)

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1949stone(金币+1,VIP+0):美军了成分有些变化 12-1 19:45
我实验中灭菌后再测定PH一般也会下降0.2个单位,好像记得是水在高温下发生电离?引发酸碱平衡变化的。
3楼2009-12-01 10:00:12
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raindrop8316

金虫 (正式写手)

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1949stone(金币+2,VIP+0): 12-1 19:45
葡萄糖与磷酸盐在碱性条件下会起反应,可能会产生一种抑制性物质,或者葡萄糖和磷酸盐与培养基中的氮源发生反应,使氮源变成不能被微生物利用的状态。

详情请参考“植病研究法” (方中达)

[ Last edited by raindrop8316 on 2009-12-2 at 11:16 ]
书到用时方恨少 钱到月底不够花
4楼2009-12-01 11:41:16
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zier1011

木虫 (著名写手)

1949stone(金币+0,VIP+0):0.2是经验值 12-1 19:45
引用回帖:
Originally posted by pph0259 at 2009-12-1 09:46:
我只知道灭菌会导致PH值降低!
实际中,我用缓冲调培养基的ph,但灭菌后,ph面目全非!!所以,人家的说法是对的!

p培养基灭菌后,pH会有所下降,这个我知道,我的疑问是为什么非得pH7.5以下的才可以灭菌前调pH值,pH7.5以上的怎么了,我们在灭菌前吧培养基灭菌所导致的pH变化考虑进去不就好了——如二楼所说,培养基灭菌后,pH一般下降0.2左右,我们灭菌前就调高0.2不行吗?
花还香香的
5楼2009-12-01 11:47:29
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lzhwin

木虫 (正式写手)


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1949stone(金币+0,VIP+0):加琼脂好像对其影响不大 12-1 19:46
如果是LB我们都不调PH,大肠杆菌还是很好伺候的
如果是组培的培养基MS B5 NB之类的把琼脂加进去再调会准一些
6楼2009-12-01 12:03:55
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kitty8682

金虫 (正式写手)

学习了
7楼2009-12-01 13:24:02
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MellonCHEN

银虫 (小有名气)

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1949stone(金币+2,VIP+0):同意 12-1 19:46
通常灭菌后培养记得ph值会降低0.2左右,所以在灭菌之前调的时候,可以考虑略微挑高一点0.2。我们实验室一般都是这么处理的,因为培养的对象是大肠杆菌,所以,用的lb培养基的ph精准度要求不是很高。
书本上写的都是最标准的方法,但是实际操作起来,还是看情况的。根据各自试验要求的不同,有些不用太过于精准的。
8楼2009-12-01 14:55:25
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shenqicc

金虫 (小有名气)

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1949stone(金币+2,VIP+0):同意 12-1 19:46
用分子级试剂配培养基时,灭菌后PH不会改变;用工业级的配,灭完菌后PH会降低0.2左右,所以我们以前都是向上调0.2后灭菌;至于LZ说的7.5估计是PH值的一个界限吧,可能书上的意思,高于7.5的PH若灭菌前向上调0.2会对培养基造成太大影响吧。另外变色的话,葡萄糖最好不要和氮源一起灭菌,会发生反应~~
Publish OR Perish!
9楼2009-12-01 15:50:59
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安宁

铁虫 (初入文坛)


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一般的微生物对培养基的环境都不是严格要求的,只要在某一范围内微生物都能承受。而且即使是同一种菌经过长期的反复活化,其最适生长环境可能会改变
10楼2009-12-01 21:28:00
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