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fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] 混合细菌的16S rDNA PCR后条带出现问题

各位,我用带GC夹子的引物扩增了约430多bp的16S rDNA片段(V6-V8区),模板是口腔复杂的细菌。但是PCR后发现,好像那条亮带横跨了500bp引物那条线(如图)。这是由于不同细菌的16S rDNA片段(V6-V8区)长度不同导致的,还是由于非特异性扩增导致的呢?期待解答中

补充说明:似乎右侧那条亮带中间有个缝······

[ Last edited by amisking on 2009-12-1 at 21:21 ]
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MellonCHEN

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
个人感觉因该不是由非特异性扩增导致的,因为看起来不像啊。不过这也是我的个人意见。
2楼2009-11-30 13:53:11
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mever

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-30 20:46
楼主太过于小心了吧
以你现在的电泳条件 根本无法区分430pb和500pb的
这个就是你的产物 试验结果很不错的
3楼2009-11-30 20:30:14
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spiderboy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主不必忧虑,电泳毕竟还没有那么精确,往往PCR产物多时,会使整条带型变粗,因为单位体积琼脂糖容纳DNA的量是有限的,量多时会使DNA带型整体往前挤,所以会超过MARKER,。。。比较真实的情况应是以带的中央为参考。
4楼2009-12-01 21:15:12
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