24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 442  |  回复: 4
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

elalei1999

铜虫 (小有名气)

[交流] 引物求助

Xba1-R:gct cta gat caa acN acN ggN gtt aaN aga g
Sma1-F:tcc ccc ggg atg gag gcg atH ggN gtt Ytg atg,
上下引物如上。Tm值相差10,采用了温度梯度50-55,退火时间30s,PCR后没有目的基因条带出现。只是在53度的二聚体较亮,其他次之。自己分析问题有以下:1、引物问题。引物过长,Tm值相差过多
2、模板问题。RNA提取有污染,降解,反转后的质量差。

请大伙指点迷津。谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

不抛弃,不放弃!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elalei1999

铜虫 (小有名气)

谢楼上。
再问“GC或AT聚集”怎讲,请在我的引物上指出。
目的片断在1000左右,延伸时间设的1min。
不抛弃,不放弃!
4楼2009-12-01 15:40:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

elalei1999

铜虫 (小有名气)

望高人回帖!
不抛弃,不放弃!
2楼2009-12-01 14:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianggene

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能原因,一是你的引物设计不好,如你所说,Tm值相差过多,而且引物设计最好避免GC或AT聚集;另外,你的目的片段多长?看看延伸时间是否够长。
3楼2009-12-01 15:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
据说两条引物的Tm差也就是1度左右吧,你的十度怕是差距也太大了。P的结果可想而知,我觉得主要原因应该在这里,重新设计引物吧。好像一般避免3端比如A、T不可连续3个,易突变,G、C不可连续3个,结合太紧。别的地方保证整体上GC含量就可以了吧。
5楼2009-12-01 17:03:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +7 castLight 2026-04-16 7/350 2026-04-17 20:05 by 关一盏灯cd
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +4 qut2026 2026-04-11 8/400 2026-04-17 16:10 by 会飞的猪157
[考研] 335求调剂 +20 想上岸呀!! 2026-04-12 23/1150 2026-04-17 10:50 by cuisz
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[考研] 恳请有学校收留 +8 柯淮然 2026-04-12 8/400 2026-04-17 09:34 by 猪会飞
[考研] 297,工科调剂? +4 河南农业大学-能 2026-04-14 4/200 2026-04-16 22:52 by wulijun2012
[考研] 294求调剂 +14 淡然654321 2026-04-15 14/700 2026-04-16 21:01 by lpl364211
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 各位老师好,求调剂,本科211,一志愿天津大学生物与医药学硕,差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
信息提示
请填处理意见