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DNA的吸光值，疑惑
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| 提取DNA后测了浓度，稀释后就做PCR了。刚开始做的很顺利，都能跑出条带，后来再过重复就跑不出条带了。把所有的东西都换了一遍只有DNA 没有换，还是没跑出来。后来重新测了一下浓度，发现浓度都降低了，而且最主要的是OD值，原来刚提出来的时候测得都是1.8多，比较纯的，现在再测都是1.3~1.7之间 或者是1.9~2.2之间，P.S. 师兄帮我选的是230nm。DNA的OD值主要应该是看OD260/280吧，那od 260/230呢？惭愧，做了真么长时间的分子了，这一点总是搞不清楚。 |
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amisking(金币+5,VIP+0): 11-29 19:27
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A 260 / A 280 的比值，用于评估样品 的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。（320差不多也就是那条曲线刚下降到0的时候）。 所以，当我们检测260/280后，如果比值在1.8-2.0之间时，我们可以说其纯度可以，那OD260的值就有效。否则，OD260的值判为无效。你说的嘌噙与嘧啶的吸光值，确实没错。但一般情况下，我们测的都是基因组、tRNA，mRNA、cDNA，所以其CG含量都比较均匀。都适用于这种方法。然而，在测某些CG含量明显不均匀的情况下，比如人工合成的寡核苷酸、引物，在CG含量过大或者过小的情况下，我们就不能用260/280的方法了。不过一般自已合成的引物，都能保证纯度的，买来的引物，或者托公司合成的寡核苷酸，也不需要我们用OD值方法重新测一下。因为产品包装上写着多少个OD，序列长度，都非常详细，纯度也是有保证的。 |
4楼2009-11-29 14:05:25
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